Rapid generation of maternal mutants via oocyte transgenic expression of CRISPR-Cas9 and sgRNAs in zebrafish - Induction et différenciation au cours du développement embryonnaire des vertébrés Accéder directement au contenu
Article Dans Une Revue Science Advances Année : 2021

Rapid generation of maternal mutants via oocyte transgenic expression of CRISPR-Cas9 and sgRNAs in zebrafish

Tong Lu
  • Fonction : Auteur
Yizhuang Zhang
  • Fonction : Auteur
Jiaguang Li
  • Fonction : Auteur
Imran Tarique
  • Fonction : Auteur
Fenfen Wen
  • Fonction : Auteur
Aijun Chen
Jiasheng Wang
  • Fonction : Auteur
Zhuoyu Zhang
  • Fonction : Auteur
Yanjun Zhang
  • Fonction : Auteur
De-Li Shi
  • Fonction : Auteur
Ming Shao
  • Fonction : Auteur correspondant
  • PersonId : 1104573

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Résumé

Maternal products are exclusive factors to drive oogenesis and early embryonic development. As disrupting maternal gene functions is either time-consuming or technically challenging, early developmental programs regulated by maternal factors remain mostly elusive. We provide a transgenic approach to inactivate maternal genes in zebrafish primary oocytes. By introducing three tandem single guide RNA (sgRNA) expression cassettes and a green fluorescent protein (GFP) reporter into Tg( zpc : zcas9 ) embryos, we efficiently obtained maternal nanog and ctnnb2 mutants among GFP-positive F 1 offspring. Notably, most of these maternal mutants displayed either sgRNA site–spanning genomic deletions or unintended large deletions extending distantly from the sgRNA targets, suggesting a prominent deletion-prone tendency of genome editing in the oocyte. Thus, our method allows maternal gene knockout in the absence of viable and fertile homozygous mutant adults. This approach is particularly time-saving and can be applied for functional screening of maternal factors and generating genomic deletions in zebrafish.

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Origine : Fichiers produits par l'(les) auteur(s)

Dates et versions

hal-03341583 , version 1 (11-09-2021)

Identifiants

Citer

Chong Zhang, Tong Lu, Yizhuang Zhang, Jiaguang Li, Imran Tarique, et al.. Rapid generation of maternal mutants via oocyte transgenic expression of CRISPR-Cas9 and sgRNAs in zebrafish. Science Advances , 2021, 7 (32), pp.eabg4243. ⟨10.1126/sciadv.abg4243⟩. ⟨hal-03341583⟩
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